如何使用反向移液技術更的移取蛋白溶液

每支移液器的量程通常都用純水和正向移液技術校準過。因此我們推薦使用正向移液技術移取水性溶液，如緩沖液，稀釋酸或堿。當移取不同于水的液體時，由于具有不同的液體特性，其移液量可能偏離所選的量程。比如 一些生物溶液的移液，可能會在移液器或試管中產生氣泡或泡沫，這將使移液量產生偏差。在這種情況下，我們推薦使用反向移液技術移取高粘度或者容易產生泡沫的液體。反向移液技術減少了噴濺，泡沫和氣泡形成。這種方法尤其適用于移取小體積的液體。

下面先介紹一下正向移液和反向移液技術的操作。

1.將按鈕壓至*停點。

2.將吸頭浸入液面下1cm處，緩慢釋放按鈕使其滑回原位。將吸頭從液體中移出，接觸容器邊緣除去多余的液體。

3.排液時，吸頭緊貼容器壁先輕按按鈕至*停點，略作停頓后，將按鈕按至第二停點（這個操作會將吸頭內的液體*排盡），將吸頭從容器中沿容器壁移出。

4.松開按鈕至準備位置。

1.將按鈕壓至第二停點。

2.將吸頭浸入液面1cm處，緩慢釋放按鈕使其滑回原位。這將時液體充滿吸頭。將吸頭從液體中取出，接觸容器邊緣去掉多余液體。

3.放液到接收容器時平穩地輕按按鈕至*停點。保持在這個位置。一些液體會殘留在吸頭中不能被放出。

4.殘留在吸頭內的液體能夠被吹回原溶劑中或者同吸頭一起丟棄。

5.松開按鈕到準備位置。

    選擇合適的移液器對于微量移液的性也很重要。

    我們使用0.5-10 μl移液器，配合10ul吸頭，同時分別使用正向移液和反向移液，移取1%牛血清白蛋白（BSA，Sigma A7030）進行移液性測試。

圖1 表明當使用反向移液技術時，移液量的變化比使用正向移液技術處于更狹窄的一個范圍。

圖2 表明使用兩種移液方式的不度。不度是估量移液的重復性的。反向移液技術可以使不度相對于正向移液技術降低50%。

    這是因為，BSA溶液含有易被疏水移液器吸頭壁吸附的疏水成分。當使用正向移液技術時，每次移液后少量的液體易殘留在吸頭中。這種趨勢會增加吹出液體體積之間的偏差，因為當重復移液時吸頭中累積的殘余液體可能增加下一次移液的移液量。而反向移液技術中有額外的液體被吸入吸頭中，這些額外的液體作用似一個蓄水池它使連續移液的移液量均等。這個蓄水池也能阻止空氣在吹出液體的zui后從吸頭口進入，這樣可以降低液體起泡的可能性。這使反向移液技術在移取小液量液體時尤其有用。由此可見，采用反向移液技術，可較好的提高移取蛋白溶液的度和重復性。